Главная

Реакция миграции лейкоцитов под слоем агарозы. Оценка метода

Преимущества метода Clausen по сравнению с миграцией в капиллярах заключаются в большей простоте и скорости анализа, в лучшей воспроизводимости результатов и более удобной документации (фиксирование пластин). При меньшем количестве клеток и АГ возможно поставить большее число проб, которые дают меньший разброс результатов. По нашим наблюдениям, краевая зона области миграции более резко очерчена, чем при использовании капиллярного метода. Выбор, между прямой и непрямой РМЛА зависит от поставленных задач.

Сравнение прямой и непрямой РМЛА

Преимущества непрямой РМЛА

1. Количество крови, необходимое для постановки одинакового числа проб, сокращается втрое

2. Существенно более высокая чувствительность вследствие продолжительности культивирования; как правило, достаточно около 0,1 количества AF для того, чтобы выявить одинаковую реактивность

3. Лучшая стандартизация условий эксперимента ввиду точно известного количества лимфоцитов

4. Отсутствие неудачных проб, обусловленных недостатком лейкоцитов у пациента

5. Возможность использовать БНФ большого числа пациентов в реакции с одними и теми же индикаторными клетками

Недостатки непрямой РМЛА

1. Увеличение почти вдвое материально-технических затрат

2. Результаты анализа становятся известными на день позже

Контрольная зона миграции должна иметь площадь по меньшей мере 20 мм². Разброс данных пораллельных проб не должен превышать ±0,10. При правильной постановке эксперимента разброс составляет около ±0,05. В этих условиях индексы миграции <0,80 и >1,20 становятся клинически значимыми. Степень торможения миграции позволяет дать только ориентировочную оценку уровня сенсибилизации, более точные результаты можно получить при постановке параллельных проб с различными концентрациями антигенов и лимфоцитов. Целесообразно для каждого нового антигена определить минимальную неспецифическую реактивную дозу (например, токсический эффект) на несенсибилизированных индивидах, а на сенсибилированных индивидах — минимальную дозу, вызывающую специфическое торможение.

При помощи РМЛА можно устанавливать факт сенсибилизации к различным антигенам (бактерии,, вирусы, грибки, опухоли, клетки трансплантата, растворимые белки, углеводы, синтетические полипептиды и др.) в той мере,, в какой они вызывают реакции клеточного иммунитета. Кроме того, БНФ лимфоцитов, подвергшихся митогенной стимуляции, может быть при помощи РМЛА исследована на наличие тормозящих миграцию лимфокинов. Быстрый анализ особенно важен для диагностики аллергии, поскольку не требуется отмывки клеток в связи с тем, что нет необходимости учитывать воздействие блокирующих AT, а условия in vivo (связывание аллергена, образование ИК) в достаточной мере представлены аутологичной плазмой. Все же для исключения гуморальных факторов (блокирующие, цитофильные).

В последнее время РМЛА используют для оценки хемотаксиса AT, ИК) рекомендуется работать с отмытыми клетками. Лейкоциты и хемотаксический агент вносят в расположенные рядом отверстия. Результаты оценивают по параболическому изменению зоны миграции в направлении отверстия схемотаксическим фактором. Для оценки можно также использовать плотность расположения клеток в зоне миграции и ориентацию отдельных клеток. Известна микромодификация РМЛА, предложенная в 1973 г. Harrington, находящая в настоящее время все более широкое применение. В данной модификации клетки, содержащиеся в капле агарозы, мигрируют в окружающую среду, содержащую АГ или другой исследуемый материал. Преимущество этого метода для клинических целей определяется очень небольшим количеством клеток, содержащихся в одной капле (2х10⁵ клеток в 1 мкл).