Главная

• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Получение суспензии клеток селезенки

Получение суспензии клеток селезенки и последующая работа с культурой клеток должны проводиться в стерильных условиях с соблюдением всех правил асептики и антисептики. Подходящим помещением для этих целей может служить бокс со шлюзом. Необходимое количество мышей забивают без эфирного наркоза путем цервикальной дислокации. Для стерильного удаления селезенки делают поверхностный надрез и отодвигают шкуру в стороны от разреза по направлению к конечностям. После вскрытия брюшной полости селезенку стерильно извлекают и помещают в охлажденный до 4 °С раствор Хенкса, налитый в чашку Петри, диаметром 12 см, установленную на горизонтальной поверхности льда. На каждую извлеченную селезенку расходуется 5 мл раствора Хенкса.

Селезенки измельчают стерильными пинцетами без следов ржавчины. Путем осторожного измельчения кусочков органов стараются перевести в суспензию возможно большее число спленоцитов. Клеточную суспензию набирают в 10-миллилитровый шприц (игла № 16). При этом большие скопления клеток остаются, а малые распадаются при прохождении через узкую иглу. Содержимое шприца переносят в центрифужные пробирки объемом 20 мл и центрифугируют в течение 5 мин при 150 g в настольной центрифуге без охлаждения (в стерильном боксе). Надосадочную фракцию отсасывают, осадок дважды отмывают равным объемом охлажденного раствора Хенкса путем ресуспендирования. Суспензию клеток при отмывке несколько раз набирают и спокойно выпускают пипеткой (10 мл).

После отмывки осадок клеток ресуспендируют в таком объеме раствора Хенкса, чтобы клетки, полученные из 4 или 5 селезенок, содержались в 1 мл суспензии. После отбора небольшой порции для подсчета клеток и определения их жизнеспособности суспензию хранят в ледяной бане не более чем 1 ч. Определение количества клеток и их жизнеспособности проводят в нестерильных условиях, при помощи окрашивания трипановым синим, в камере Biirker. Приготовленная вышеописанным способом суспензия клеток селезенки содержит 96—98% жизнеспособных лимфоцитов, выход составляет в среднем 70— 100 миллионов спленоцитов с каждой селезенки.