Главная

• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Встречный электрофорез. Оценка результатов

Результаты реакции оценивают визуально, в некоторых случаях используют лупу; пластины геля рассматривают при косом освещен пи или на темном фоне. Реакция считается положительной, если картина преципитации такая же, как в контрольных лунках. В случае слабой преципитации или при сомнительных результатах делают ряд разведений исследуемого образца или АС для предотвращения эффекта прозопы. Едва заметные преципитаты можно сделать более отчетливыми, если хорошо отмытые пластины геля погрузить на 10 мин в 1% раствор танина. Окрашивание пластин амидочерным 10 В или нигрозином обычно не улучшает результаты.

Расположение преципитатов зависит как от природы геля, так и от концентрации антигена и антитела. В геле агарозы преципитаты располагаются посередине между лунками; в геле агара антитела быстрее продвигаются к катоду, и преципитаты образуются ближе к лунке с антигеном. Для выявления антигенов лучше использовать гель агарозы или смешанный гель агара-агарозы. Антитела удобнее определять в геле агара. Однако при использовании агара следует учитывать опасность того, что преципитаты могут образовываться непосредственно у лунки с антигенами и в случае использования мутной АС их невозможно обнаружить.

Еще одним источником ошибок может стать продолжительность электрофореза; время электрофореза должно быть тщательно установлено в системе контрольный антиген—контрольная АС (заниженное время приводит к ложноотрицательным результатам, завышенное, при трехлуночной системе расположения образцов, — к ложноположительиым). Неспецифические преципитаты могут формироваться в виде слабых диффузных полос, если использовать очень свежую или, наоборот, очень старую сыворотку. Опытный экспериментатор должен уметь отличать их от истинных преципитатов. Количественная оценка результатов возможна при использовании ряда последовательных разведений исследуемого образца и сывороток с известным титром.