| |
Главная
|
Встречный электрофорезВстречный электрофорез. Методика Принцип электросинереза или встречного электрофореза применил в 1969 г. Бедарида для обнаружения преципитатов антиген—антитело. Иммунопреципитация происходит в слое носителя, причем в отличие от метода Ухтерлони контакт антигена с антителом происходит не вследствие свободной диффузии, а под влиянием постоянного электрического поля. Белки представляют собой амфолиты; ввиду различий аминокислотного состава они могут мигрировать в щелочной среде с разной скоростью и в разных направлениях (анодном, катодном). Если антиген и соответствующая преципитирующая АС мигрируют в разных направлениях, становится возможным их движение друг навстречу другу в слое геля или на ацетат-целлюлозной пленке. Преципитация и одновременно накопление в одном месте участников реакции наблюдается между стартовыми лунками обоих компонентов в течение 30—180 мин в зависимости от приложенного напряжения. Встречный иммуноэлектрофорез (ВИЭФ) предназначен для обнаружения и идентификации преципитирующих систем антиген—антитело при условии, что антиген обладает электрофоретической подвижностью, отличной от той, которой обладают иммуноглобулины. Эксперимент проводится с компонентами, мигрирующими в противоположных направлениях или в одном направлении, но с различной скоростью. В настоящее время ВИЭФ применяют в основном для определения поверхностного антигена гепатита В (HBsAg), а-фетопротеина (АФП) и антител к ним. Необходимым условием для ВИЭФ является наличие моноспецифической преципитирующей сыворотки. Движение антител в электрическом поле может искажаться под влиянием электроэндоосмоса. Электроэндоосмос представляет собой медленное движение жидкой среды в сторону катода, возникающее вследствие увлечения жидкости частицами твердой фазы с прилегающими к ним положительно заряженными молекулами воды. Катодный ток жидкости может снизить скорость движения частиц белка к аноду или даже изменить его на обратное. АФП и HBsAg перемещаются в а2-области к аноду, в то время как иммуноглобулин в щелочной среде перемещаются к катоду. При контакте обоих партнеров реакции образуются резкие полосы преципитации, хорошо заметные при боковом освещении и на темном фоне. Модификации этого метода получили в работах разных авторов самые различные названия: иммуноэлектродиффузия, контраиммуноэлектрофорез, иммуноэлектроосмофорез, встречный (cross — over) электрофорез, иммунопреципитационный электрофорез. Предложенный в 1970 г. Коном метод определения АФП основан на этом же принципе. |